三分排列3

環狀RNA實時定量PCR

  • 簡介
  • 實驗流程
  •        circRNA是目前生命科學領域新興的研究熱點分子之一。區別于傳統的線性RNA,circRNA具有獨特的閉合環狀結構,使得其對核酸酶不敏感,所以比線性RNA更為穩定,非常適合作為臨床診斷標志物(biomarker)。近期研究表明,circRNA主要通過吸附miRNA抑制后者對相應靶基因的調控,稱之為競爭性內源RNA(ceRNA),而與疾病相關聯miRNA的相互作用說明circRNA對疾病的調控起著非常重要的功能。

    Aksomics(康成生物)為您提供一站式的circRNA實時定量PCR技術服務,您只需要提供保存完好的組織或細胞樣本,本公司專業技術服務人員就可為您完成circRNA實時定量PCR實驗操作和數據分析,提供您完整的實驗報告,為你節省大量的時間和精力。

  • 1. 獨特的引物設計

           由于circRNA獨特的閉合環狀結構,在進行實時定量PCR檢測的時候需要更為特異的引物設計;針對circRNA特異的back splicing site,引物設計在該位點兩側(如下圖),即“外向引物”(區別于線性RNA的內向引物)。



    2. 樣品RNA抽提

           a.組織樣本:取適量(50-100mg)新鮮組織或正確保存的組織樣本,勻漿后用Trizol試劑抽提RNA。

           b.細胞樣本:取1×106-1×107細胞,PBS清洗細胞,吸去PBS后用Trizol試劑抽提RNA。

    3. RNA質量檢測

           a.紫外線吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值,獲得RNA的濃度及并通過  A260/A230及A260/A280的吸收比值判定RNA的純度;

           b.甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整性。

    4. 逆轉錄合成cDNA

           利用random primer進行RT反應,合成cDNA。

    5. 實時定量PCR

           以合成的cDNA作為模版進行實時定量PCR擴增;同時檢測每個樣本中內參基因的表達量,校正上樣誤差。

    6. 分析結果、提供實驗報告

           分析實時定量PCR結果,提供實驗報告,包括詳細的實驗方法、實時定量PCR實驗數據和圖表。