三分排列3

TMT標記定量技術

  • 簡介
  • 技術優勢
  • 實驗流程
  • 應用領域
  • 儀器平臺
  • 樣品要求
  • Thermo ScientificTM公司的TMT (Tandem Mass Tag)標記定量技術和AB SCIEXTM公司的iTRAQ技術都屬于二級報告離子定量技術,具有相似的原理(圖1):提取樣品中的總蛋白并酶解為多肽,多肽N-term以及末端Lysine側鏈基團的游離氨基能夠與TMT標簽進行共價結合,從而使每條多肽都帶上至少一個TMT標簽;不同TMT標簽具有相同的分子量,但是卻有不同的同位素分布,來自不同樣品的相同多肽在MS1中同時被分離,經裂解后在MS2中釋放出reporter,代表該多肽在對應樣品中的相對含量。TMT (iTRAQ)最高可同時標記10 (8)組不同的生物樣品,且一次性完成全部樣品的定性定量分析,顯著的提高了實驗通量,降低了定量誤差,可發現更細微的生物學差異。

                                         圖1. TMT標簽結構和定量原理。                                        



  • ●通量與深度的完美結合

           在質譜本身高通量的基礎上,TMT技術又進一步擴大了這種優勢,相比SILAC、Dimethyl等標記定量技術,TMT可同時完成多至10個不同樣品的定量分析;運用high pH反相HPLC分級為8個組分,每個組分再經low pH反相HPLC分離,兩次正交液相分離,顯著的提高了鑒定和定量深度。
    ●特異性與靈敏度兼備:

           基于質譜的蛋白質組學精確到單個氨基酸位點,蛋白鑒定準確,靈敏度高,是profiling分析和PTM研究的強大工具。
    ●嚴格的質量控制:

           數據穩定、重現性好,定量動態范圍廣,多個樣品平行處理極大的降低了實驗誤差。
    ●專業的數據分析:

           標準的搜庫流程,專業的統計和生信分析,出版級的圖表展示,完整全面的分析報告。




  • ●疾病標志物篩選
    ●分子機制研究
    ●藥物作用靶點研究
    ●特殊功能蛋白質篩選

  • Thermo Scientific EASY-nLC 1200

    Thermo Scientific Q Exactive




  • 樣品類型 樣品要求
    蛋白質提取物 濃度 >1μg/μl,蛋白質總量 >200μg
    細胞樣品 細胞量 >5×106
    組織樣品 動物、微生物組織濕重  >100mg
    體液樣品 血液體積 >500μl,血清、血漿、腦脊液>500μl,尿液>50ml