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非標定量技術

  • 簡介
  • 技術優勢
  • 技術流程
  • 應用領域
  • 儀器平臺
  • 樣品要求
  •        采用穩定同位素標記定量的方法,能夠精確的對蛋白表達水平進行定量分析。然而,標記定量的方法也存在某些不足之處:包括,額外的樣品處理過程,昂貴的標記試劑,不完全標記導致樣品復雜化,低豐度多肽難以檢測,可標記樣品數量有限等。作為替代,非標記定量技術(LFQ,label-free quantification)能夠避免此類缺陷。LFQ定量通常可采用兩種方式:(1)譜圖計數法(Spectral counting),使用多肽被鑒定次數來代表對應多肽的相對含量,進而計算出對應蛋白的相對表達量;(2)母離子強度(precursor ion intensity),提取鑒定到的多肽在一級質譜(MS1)中的色譜峰面積代表其相對含量,然后計算出對應蛋白的相對表達量。和標記定量技術不同在于:標記定量樣品預先混合并同時進行LC-MS/MS檢測,而LFQ技術要求每個樣品獨立進行制備和LC-MS/MS檢測,因此準確性和通量弱于標記定量技術。 

    圖1. Label-free定量技術原理。


  • LFQ定量技術克服了同位素標記定量技術的諸多限制:更加靈活,適用于各種樣品;更高的靈敏度,定量更多的蛋白。
    ● 特異性與靈敏度兼備:基于質譜的蛋白質組學精確到單個氨基酸位點,蛋白鑒定準確,靈敏度高,是profiling分析和PTM研究的強大工具。
    嚴格的質量控制:數據穩定、重現性好,定量動態范圍廣,多個樣品平行處理,接近標記定量的定量準確性。
    專業的數據分析:標準的搜庫流程,專業的統計和生信分析,出版級的圖表展示,完整全面的分析報告。

  • ●疾病標志物篩選
    ●分子機制研究
    ●藥物作用靶點研究
    ●特殊功能蛋白質篩選

  • Thermo Scientific EASY-nLC  1200

    Thermo Scientific Q Exactive 


  • 樣品類型 樣品要求
    蛋白質提取物 濃度 >1μg/μl,蛋白質總量 >200μg
    細胞樣品 細胞量 >5×106
    組織樣品 動物、微生物組織濕重  >100mg
    體液樣品 血液體積 >500μl,血清、血漿、腦脊液>500μl,尿液>50ml