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非標定量磷酸化

  • 簡介
  • 實驗流程
  • 案例展示
  • 樣品要求
  •        蛋白質磷酸化是一種重要的翻譯后修飾(PTM),它動態可逆的調控細胞中幾乎任意一個生物學過程。磷酸化信號通路的失調是癌癥等諸多疾病的標志性事件,同時蛋白激酶也是許多藥物的主要作用靶點,因此具有極大的研究價值[2]。伴隨著基于質譜的蛋白質組學技術和磷酸化多肽富集方法以及高通量定量技術的不斷發展,磷酸化蛋白組學已經成為目前最為成熟的PTM研究方向。TiO2對磷酸化多肽具有很高的特異性,廣泛運用于絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸(pSTY)的磷酸化富集研究;酪氨酸磷酸化(pY)豐度往往較低,TiO2富集后也較難檢測,通常需要采用特異性抗體進行富集,或與TiO2串聯富集。結合磷酸化富集技術的高效性與質譜技術的高通量,深入研究在各種生理病理條件下磷酸化蛋白組動態變化過程變得實際可行且意義重大。


    圖1.定量磷酸化蛋白組技術原理和磷酸化信號調控的多種生物學過程[3]。

    Aksomics(原康成生物)提供標準的定量磷酸化蛋白質組學一站式服務,您只需提供保存完好的生物樣品,Aksomics專業的技術服務團隊為您完成從樣品制備到數據分析全部過程,并且提供完整的分析報告。如果酪氨酸磷酸化是您的重點關注對象,我們還將提供pY深度富集和分析服務。

    參考文獻

    1. Larance, M. & Lamond, A. I. Multidimensional proteomics for cell biology. Nature reviews. Molecular cell biology 16, 269-280, doi:10.1038/nrm3970 (2015). [PMID: 25857810].
    2. Macek, B., Mann, M. & Olsen, J. V. Global and site-specific quantitative phosphoproteomics: principles and applications. Annual review of pharmacology and toxicology 49, 199-221, doi:10.1146/annurev.pharmtox.011008.145606 (2009). [PMID: 18834307].
    3. Humphrey, S. J., James, D. E. & Mann, M. Protein Phosphorylation: A Major Switch Mechanism for Metabolic Regulation. Trends in endocrinology and metabolism: TEM 26, 676-687, doi:10.1016/j.tem.2015.09.013 (2015). [PMID: 26498855].





  • Label-free定量

  •        運用高通量label-free定量磷酸化蛋白組學技術分析極短時間(30s)和中等時間(10min)段內胰島素刺激對蛋白磷酸化水平的影響,據此來研究早期胰島素信號傳遞過程和動態調控關系[4]。
           運用高通量磷酸化蛋白組學技術研究胰島素在0-30s以及0-10min時間段內蛋白磷酸化水平變化趨勢(a)。對時間分辨的磷酸化蛋白組數據進行聚類分析,能夠發現胰島素信號通路中的功能相關節點,粗體顯示節點中的新成員(b)。


           根據蛋白磷酸化水平變化模式,發現新的生物學現象:(a)兩個相距很近的磷酸化位點具有截然不同的磷酸化模式,意味著不同的調控模式。(b)研究信號通路間的cross-talk。由Frs2介導的INSR通路與FGFR通路間的cross-talk。


  • 樣品類型 樣品要求
    蛋白質提取物 濃度 >1μg/μl,蛋白質總量 >4mg
    細胞樣品 細胞量 >2×107
    組織樣品 動物、微生物組織濕重 >100mg

    注:酪氨酸磷酸化需要更多的蛋白樣品,詳情請咨詢Aksomics技術人員。