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ChIP-qPCR

  • 簡介
  • 技術特點
  • 技術服務流程
  •        Aksomics(原康成生物)提供ChIP-qPCR服務,能夠檢測特定轉錄因子/組蛋白修飾與已知基因啟動子區域的結合;在已知啟動子范圍內尋找特定轉錄因子/組蛋白修飾的結合位點。

           ChIP-qPCR完美結合了ChIP技術和實時定量PCR技術。ChIP技術利用抗體特異性富集與特定轉錄因子/組蛋白修飾結合的DNA片段;qPCR技術使用SYBR熒光染料,非特異性的摻入DNA雙鏈,發射熒光,保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步,最后利用Ct值進行定量分析。ChIP-qPCR能夠專一,靈敏,快速,高重復地定量生物樣品中特定轉錄因子/組蛋白修飾與已知基因啟動子的結合。

  • ● 高特異性,針對感興趣的基因啟動子設計特異性的實時熒光定量PCR引物;

    ● 超寬的線性范圍,可跨越7個數量級;

    ● 精確度高,重復性好;

    ● 靈敏度高


  • 實驗流程

    A. 樣品交聯,甲醛處理細胞,交聯DNA與DNA結合蛋白

    B. 超聲打斷染色質,裂解細胞,并以超聲波將染色質打斷成400-500bp的片段

    C. 染色質免疫共沉淀,將B所得片段分成兩份,一份與特異性抗體進行免疫共沉淀(ChIP),另一份作為Total input樣品

    D. DNA純化,將C所得兩份蛋白-DNA復合物解交聯,純化分離DNA片段。ChIP富集的DNA片段(ChIP DNA),Total input樣品中的DNA片段(Total input DNA)

    E. 實時熒光定量PCR檢測



    數據處理

      ● Total input DNA樣品作為模板,用待測基因特異性引物進行qPCR,檢測得到Ct值(Input)

      ● ChIP DNA樣品作為模板,用待測基因特異性引物進行qPCR,檢測得到Ct值(ChIP)

      ● 待測基因免疫共沉淀的效率(ChIP / Total input)可通過以下公式計算:

        %(ChIP / Total input) = 2^[ Ct (Input)- Ct (ChIP) ] * 100